ISSN: 2456-3102
వాడిమ్ టైమర్‌బావ్, సెర్గీ డోల్గోవ్ మరియు టాట్యానా మిటియోచ్కినా
వంశపారంపర్యంగా నిర్మించబడిన మొక్కల పరిమాణం మరియు వాటి స్పష్టమైన ద్రవ్య ఆచరణాత్మకతతో సంబంధం లేకుండా, అటువంటి పంటలను సమాజం బుద్ధిపూర్వకంగా గుర్తించింది, ప్రధానంగా సుదూర జీవన రూపాల నుండి (సూక్ష్మదర్శిని జీవులు, అంటువ్యాధులు మరియు మొదలైనవి) .) జన్యుమార్పిడి మొక్కలలో లక్ష్య లక్షణాలను ప్రకటించడం కోసం మరియు యాంటీ-టాక్సిన్స్ నుండి రక్షణకు ప్రత్యేక గుర్తులుగా మరియు కలుపు సంహారకాలు. ఈ పరిస్థితులలో, బయటి వంశపారంపర్య పదార్థాలు లేకుండా, ప్రాథమికంగా బ్యాక్టీరియా ప్రారంభ స్థానం లేకుండా మరియు అంటువ్యాధి నిరోధక వ్యతిరేక లక్షణాలు లేకుండా, కొత్త గాఢమైన లాభదాయకమైన రకాల దిగుబడిని పొందగలిగే విధానాలకు ప్రత్యేకమైన నిరాశ ఇవ్వబడుతుంది. వంశపారంపర్యంగా సర్దుబాటు చేయబడిన లైఫ్ ఫారమ్‌లను ఓపెన్ ఫ్రేమ్‌వర్క్‌లలోకి విడుదల చేయండి, ప్రత్యేకించి GMOతో గుర్తించబడిన సందేహాలతో లొకేల్‌లలో, ఉదాహరణకు, యూరోపియన్ యూనియన్.
ఇటీవలి దశాబ్దంలో మార్కర్ జీవులను లేకుండా పొందే పద్ధతులు అసాధారణమైన ప్రాముఖ్యతను సంతరించుకున్నందున, పరిశోధనలలో ఎక్కువ భాగం కొత్త ఆవిష్కరణలు మరియు వెక్టర్ ఫ్రేమ్‌వర్క్‌ల మెరుగుదలకు ఇవ్వబడ్డాయి. ఈ పనిలో, ఇబ్బంది కలిగించే DNAని ఖాళీ చేయడానికి మేము pMF వెక్టర్స్ (ప్లాంట్ రీసెర్చ్ ఇంటర్నేషనల్, వాగెనింగెన్, నెదర్లాండ్స్) (షార్ట్ మరియు ఇతరులు, 2004)తో ఒక సైట్-స్పష్టమైన రీకాంబినేస్‌ను ఉపయోగించాము. ఈ ఫ్రేమ్‌వర్క్ యొక్క ప్రాథమిక ప్రాధాన్యత స్థానం దాని వరుస రెండు రెట్లు ఎంపిక. ఆగ్రోబాక్టీరియం మధ్యవర్తిత్వ మార్పు తర్వాత ప్రాథమిక దశ యాంటీ-మైక్రోబయాల్స్‌ను ఉపయోగించడం ద్వారా పునరుత్పత్తిని నిర్ణయించడం, ఉదాహరణకు, కనామైసిన్, హైగ్రోమైసిన్ లేదా ఫాస్ఫినోట్రిసిన్, మరియు దోషరహిత రీకాంబినేషన్ గమ్యస్థానాలకు (RS) చుట్టుముట్టబడిన DNA సమూహాలను మరింతగా పారవేయడం. దృష్టిలోపల క్రియారహితం చేయబడిన రీకాంబినేస్ R యొక్క ప్రారంభము గ్లూకోకార్టికాయిడ్ రిసెప్టర్ యొక్క లిగాండ్-నియంత్రణ ప్రాంతం (LBD). డెక్సామెథాసోన్ (డెక్స్) యొక్క సమాధానంలో మొక్క కణజాలం బ్రూడింగ్ చేసిన తర్వాత దాని చురుకుదనం పూర్తవుతుంది. 5-ఫ్లోరోసైటోసిన్ (5-ఎఫ్‌సి)తో కూడిన మాధ్యమంపై తదుపరి ఎంపిక కోడా నాణ్యతను కలిగి ఉన్న మొక్కల కణజాలాల మెరుగుదలను అరికడుతుంది (సైటోసిన్ డీమినేస్ విషపూరితం కాని 5-ఎఫ్‌సి కంటే సైటోటాక్సిక్ 5-ఫ్లోరోరాసిల్‌కు మారుతుంది).
వంశపారంపర్యంగా మారిన మొక్కలలో మార్కర్ లక్షణాలు, ముఖ్యంగా యాంటీ-మైక్రోబయల్ వ్యతిరేకత, భూమికి మరియు మానవ శ్రేయస్సుకు ప్రమాదాలకు సంబంధించిన భయాల కారణంగా ప్రజల దృష్టిలో ఆందోళన కలిగిస్తుంది. బయటి వంశపారంపర్య పదార్థాన్ని కలిగి ఉండని జన్యుమార్పిడి మొక్కల నిర్మాణం, ముఖ్యంగా బ్యాక్టీరియా మరియు వైరల్ మూలాలను చాలా వరకు ఒత్తిడిని తగ్గిస్తుంది. ఇక్కడ మేము Z. రౌక్సీ రీకాంబినేస్ R మరియు CodA-nptII ద్విఫంక్షనల్ ఎంచుకోదగిన నాణ్యతను కలిగి ఉన్న pMF ఫ్రేమ్‌వర్క్‌ని ఉపయోగించాము, ఇది సాన్స్ మార్కర్ ట్రాన్స్‌జెనిక్ టమోటా మరియు యాపిల్ మొక్కలను ఉత్పత్తి చేయడం కోసం ఉష్ణమండల మొక్క థౌమాటోకాకస్ డానియెల్లి సహజ నాణ్యతతో సమం చేయబడిన EPlicit8 నుండి చాలా తీపి థౌమటిన్II నాణ్యతను తెలియజేస్తుంది. ప్రకటనకర్త మరియు rbsS3A ఎలిమినేటర్. మేము రెండు విభిన్న రీకాంబినేస్ ఎన్‌లిస్ట్‌మెంట్‌లను ఉపయోగించాము.
5-ఎఫ్‌సి మీడియాలో తదుపరి ఎంపికతో అవసరమైన కాలిస్‌ల ప్రారంభ ఎంపిక మరియు ట్రాన్స్‌జెనిక్ మొక్కల ఆకులు లేదా పెటియోల్స్ యొక్క డెక్సామెటాసోన్ చికిత్స వాయిదా వేయబడింది. ఎలెక్టివ్‌గా మేము వెక్టార్ ద్వారా మొక్కలను మార్చాము, నిర్దిష్ట మార్కర్‌లు లేకుండా కేవలం థౌమాటిన్ ఆర్టిక్యులేషన్ టేప్‌ను అందించాము. ఈ పరిస్థితికి సంబంధించిన ట్రాన్స్‌జీన్‌లు అన్ని రీజెనరెంట్‌ల PCR పరిశోధన ద్వారా ఎంపిక చేయబడ్డాయి. మేము PCR ద్వారా పూర్తిగా విడదీయబడిన 170 ట్రాన్స్‌జెనిక్ టొమాటోలను కొనుగోలు చేసాము. రీకాంబినేస్ కదలికను అంగీకరించిన తర్వాత పూర్తిగా సాన్స్ మార్కర్ ట్రాన్స్‌జెనిక్ టొమాటో లైన్ మాత్రమే పొందబడింది. తులనాత్మక ఫలితాలు ముందస్తు నిర్ణయం ద్వారా పొందబడ్డాయి. thaumatinII టేప్ ద్వారా ప్రత్యక్ష మార్పు రెండు మార్కర్ రహిత మొక్కల గురించి కూడా వచ్చింది. వివిధ మరియు విలక్షణమైన లేదా అసంపూర్ణమైన T-DNA చేరికల సామీప్యత కారణంగా ఫ్రాగ్మెంటెడ్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ మరియు క్రోమోజోమ్ పునర్విమర్శలు సాధారణ మార్పు టమోటా మొక్కల యొక్క వివిధ సందర్భాల్లో జరగాలని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము.
మేము అదనంగా మూడు ఉచిత ట్రాన్స్‌జెనిక్ యాపిల్ లైన్‌లను పొందాము, అవి T-DNA వారసత్వాల దగ్గరి కోసం PCR ద్వారా పూర్తిగా విడదీయబడ్డాయి. మేము ఆ సమయంలో అన్ని ఉచ్చారణ టేప్ ముక్కలను కలిగి ఉన్న ఒక చెక్డ్ లైన్‌తో సాన్స్ మార్కర్ ప్లాంట్ల ఎంపిక కోసం వాయిదా వేసిన పద్ధతిని ఉపయోగించాము. రీకాంబినేస్ కదలికను అంగీకరించిన తర్వాత మేము 30 కంటే ఎక్కువ సబ్‌లైన్‌లను పొందాము, వాటిలో ఎక్కువ భాగం కనామైసిన్ నుండి తమ రక్షణను కోల్పోయింది. PCR మరియు సదరన్ స్మెర్ పరీక్షలో ప్రతి ఒక్క దురదృష్టకర నాణ్యత మరియు RS గమ్యస్థానాల మధ్య ఏర్పాట్లు రీకాంబినేషన్ ప్రక్రియ ద్వారా ఖాళీ చేయబడ్డాయి, అయితే అడ్మినిస్ట్రేటివ్ భాగాలతో ఉత్సాహం యొక్క నాణ్యత పూర్తిగా కొనుగోలు చేయబడిన ప్లాంట్‌లలో అందుబాటులో ఉంది. ఏది ఏమైనప్పటికీ సెమీ-అమౌంట్ PCR పరీక్ష ద్వారా మేము చాలా వరకు థౌమాటిన్ నాణ్యత యొక్క ఉచ్చారణను గుర్తించగలము, అయినప్పటికీ అన్ని సబ్‌లైన్‌ల గురించి రాలేదు. క్రియేషన్ మార్కర్ ఫ్రీ యాపిల్ ప్లాంట్ల కోసం తక్షణ మార్పు పనికిరాని కారణంగా ముందస్తు నిర్ధారణ వ్యవస్థ. pMF ఫ్రేమ్‌వర్క్ యాపిల్ లేదా ఇతర మొండి పంటలు లేకుండా సృష్టించడానికి సహేతుకమైనది, ఎందుకంటే సిస్జెనిక్ టమోటా మొక్కలు చమత్కార నాణ్యత ద్వారా ప్రత్యక్ష మార్పు ద్వారా పొందవచ్చు. రష్యన్ సైన్స్ ఫౌండేషన్ యొక్క అన్వేషణ అవార్డు Nº 14-50-00079 ద్వారా పరీక్షకు కొంత మేరకు రాయితీ లభించింది.