ISSN: 2169-0111
సెడ్రిక్ హ్యాపీ ంబకం
డిస్ట్రోఫిన్ జన్యువులోని ఉత్పరివర్తనలు డుచెన్ మస్కులర్ డిస్ట్రోఫీ వంటి న్యూరోమస్కులర్ డిజార్డర్లకు దారితీస్తాయి, ఇది ప్రాణాంతకమైన X-లింక్డ్రెడిటరీ వ్యాధి, ఇది 100,000 మంది పురుషులకు 19.8 మంది ప్రబలంగా ఉంటుంది. కార్టికోస్టెరాయిడ్స్ లేదా మోర్ఫోలినో యాంటిసెన్స్ ఒలిగోమర్ ఇంజెక్షన్లతో ప్రస్తుతం అందుబాటులో ఉన్న క్లినికల్ థెరపీలు పరిమిత ఫినోటైపిక్ మెరుగుదలని అందిస్తాయి. మా అధ్యయనం PRIMEediting సాంకేతిక సామర్థ్యాన్ని కొలవడం లక్ష్యంగా పెట్టుకుంది. ఈ సాంకేతికత Cas9 H840A నిక్కేస్తో కలిపిన మోలోనీ మురిన్ లుకేమియావైరస్ రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్టేజ్ కోసం PRIME ఎడిటర్ప్లాస్మిడ్ (PE2 లేదా PE3) కోడింగ్ను ఉపయోగిస్తుంది మరియు ప్రైమర్ బైండింగ్సైట్లు (PBS) మరియు రివర్స్ టెంప్లేట్ట్రాన్స్క్రిప్ట్) కలిగిన పెగ్ఆర్ఎన్ఎ కోసం ప్లాస్మిడ్ కోడింగ్ను ఉపయోగిస్తుంది. ఇది జన్యువులో నిర్దిష్ట న్యూక్లియోటైడ్ ప్రత్యామ్నాయాలు, తొలగింపులు లేదా చొప్పింపులను అనుమతిస్తుంది. మేము ఒకే న్యూక్లియోటైడ్ను సవరించడం ద్వారా STOP కోడాన్ను పరిచయం చేయడానికి అనేక hDMDexons (9, 20, 35,43, 51, 55, మరియు 61) లక్ష్యంగా వేర్వేరు పెగ్ఆర్ఎన్ఏలను రూపొందించాము. HEK293T కణాలు PE2 మరియు pegRNAతో ఏకకాలంలో బదిలీ చేయబడిన మూడు రోజుల తర్వాత DMEM కల్చర్ మీడియా నుండి సేకరించబడ్డాయి. ఎక్సోన్లు PCR విస్తరించబడ్డాయి మరియు సాంగర్ పద్ధతిని ఉపయోగించి క్రమం చేయబడ్డాయి. ఎడిటింగ్ శాతాన్ని అంచనా వేయడానికి EditR ప్రోగ్రామ్ని ఉపయోగించి ఫలితాలు విశ్లేషించబడ్డాయి. 6 నుండి 11 % (PE2) మరియు 21% (PE3) మధ్య ఎడిటింగ్ సామర్థ్యంతో DMD జన్యువులోని నిర్దిష్ట C నుండి T మరియు G నుండి T ప్రత్యామ్నాయాలను PRIME ఎడిటింగ్ అనుమతిస్తుందని మేము నిర్ధారించాము. మొదటిది 6 రోజుల తర్వాత పునరావృతమయ్యే బదిలీలు ఎక్సోన్స్9 మరియు 35లో 15 % (PE2) ఎడిషన్ను చూపించాయి. PAM సీక్వెన్స్లో అదనపు మ్యుటేషన్ (ఎక్సాన్ 35) ఒక బదిలీకి PE2 ఫలితాన్ని 38%కి మెరుగుపరిచింది. అందువలన, PRIMEediting DMD జన్యువులోని నిర్దిష్ట ప్రత్యామ్నాయాలను అనుమతిస్తుంది మరియు DMD జన్యువులోని పాయింట్ మ్యుటేషన్లను డిస్ట్రోఫిన్ వ్యక్తీకరణకు దారితీయడానికి సరిచేయడానికి ఉపయోగించవచ్చు.