జన్యు ఇంజనీరింగ్‌లో పురోగతి
అందరికి ప్రవేశం
ISSN: 2169-0111
ISSN: 2169-0111
Cédric Happi Mbakam
డిస్ట్రోఫిన్ జన్యువులోని ఉత్పరివర్తనలు డ్యూచెన్ మస్కులర్ డిస్ట్రోఫీ వంటి నాడీ కండరాల రుగ్మతలకు దారితీస్తాయి, ఇది ప్రాణాంతక ఎక్స్-లింక్డ్ వంశపారంపర్య వ్యాధి, ఇది 100000 మంది మగవారి పుట్టుకకు 19.8 వ్యాప్తి చెందుతుంది. మోర్ఫోలినో యాంటిసెన్స్ ఒలిగోమర్ ఇంజెక్షన్‌లతో కార్టికోస్టెరాయిడ్‌లతో ప్రస్తుతం అందుబాటులో ఉన్న క్లినికల్ థెరపీలు పరిమిత సమలక్షణ మెరుగుదలను అందిస్తాయి. మా అధ్యయనం PRIME ఎడిటింగ్ టెక్నాలజీ సామర్థ్యాన్ని కొలవడానికి లక్ష్యంగా పెట్టుకుంది. ఈ సాంకేతికత Cas9H840A నిక్కేస్‌తో ఫ్యూజ్ చేయబడిన మోలోనీమురిన్ లుకేమియా వైరస్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ కోసం PRIME ఎడిటర్ ప్లాస్మిడ్ (PE2 లేదా PE3) కోడింగ్‌ను ఉపయోగిస్తుంది మరియు ప్రైమర్ బైండింగ్ సైట్‌లు (PBS) మరియు రివర్స్ ట్రాన్‌స్క్రిప్ట్‌టేస్ కలిగిన పెగ్‌ఆర్‌ఎన్‌ఎ కోసం ప్లాస్మిడ్ కోడింగ్‌ను ఉపయోగిస్తుంది. ఇది నిర్దిష్ట న్యూక్లియోటైడ్ ప్రత్యామ్నాయాలను అనుమతిస్తుంది, జన్యువులో తొలగింపులు లేదా చొప్పించడం. ఒకే న్యూక్లియోటైడ్‌ను సవరించడం ద్వారా STOP కోడాన్‌ను పరిచయం చేయడానికి మేము అనేక hDMD ఎక్సోన్‌లను (9, 20, 35,43, 51, 55, మరియు 61) లక్ష్యంగా చేసుకుని వివిధ పెగ్‌ఆర్‌ఎన్‌ఏలను రూపొందించాము. HEK293Tసెల్‌లు PE2 మరియు pegRNAతో ఏకకాలంలో బదిలీ చేయబడిన మూడు రోజుల తర్వాత DMEM కల్చర్ మీడియా నుండి సేకరించబడ్డాయి. సాంగర్ పద్ధతిని ఉపయోగించి Exonswere PCR విస్తరించబడింది మరియు క్రమం చేయబడింది. ఫలితాలు ఎడిటింగ్ శాతాన్ని అంచనా వేయడానికి EditR ప్రోగ్రామ్‌ని ఉపయోగించి విశ్లేషించబడ్డాయి. 6 నుండి 11 % (PE2) మరియు 21% (PE3) మధ్య ఎడిటింగ్ సామర్థ్యంతో DMD జన్యువులో నిర్దిష్ట C నుండి T మరియు G నుండి T ప్రత్యామ్నాయాలను PRIME ఎడిటింగ్ అనుమతిస్తుందని మేము ధృవీకరించాము. మొదటిది 15 % వరకు చూపిన 6 రోజుల తర్వాత పునరావృతమయ్యే బదిలీలు ( PE2) ఎడిషన్ ఎక్సోన్స్ 9 మరియు 35. PAM సీక్వెన్స్‌లో అదనపు మ్యుటేషన్ (ఎక్సాన్ 35) మెరుగుపడింది ఒకే బదిలీకి PE2 ఫలితంగా 38%. అందువల్ల, PRIME సవరణ DMD జన్యువులోని నిర్దిష్ట ప్రత్యామ్నాయాలను అనుమతిస్తుంది మరియు డిస్ట్రోఫిన్ వ్యక్తీకరణకు దారితీసే DMD జన్యువులోని పాయింట్‌మ్యుటేషన్‌లను సరిచేయడానికి ఉపయోగించవచ్చు.