జర్నల్ ఆఫ్ క్లినికల్ అండ్ ఎక్స్పెరిమెంటల్ ఆప్తాల్మాలజీ
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

హ్యూమన్ కార్నియల్ ఎండోథెలియల్ సెల్ ఐసోలేషన్ యొక్క ప్రామాణీకరణ మరియు మానవ కార్నియల్ ఎండోథెలియల్ కణాల కోసం ఒక పరంజాగా మానవ అమ్నియోటిక్ మెంబ్రేన్‌ను ఉపయోగించడం

కల్పనా సురేష్, అలాన్ మాథ్యూ పున్నూస్, సారా కురువిల్లా మరియు తన్వి ఖన్నా

లక్ష్యాలు: హ్యూమన్ కార్నియల్ ఎండోథెలియల్ సెల్స్ (HCECs) యొక్క ఐసోలేషన్‌ను ప్రామాణీకరించడం మరియు వివిక్త HCECల కోసం నిరాదరణ పొందిన మానవ అమ్నియోటిక్ మెంబ్రేన్ (HAM)ని ఒక పరంజాగా ఉపయోగించడం.
పద్ధతులు: మానవ అమ్నియోటిక్ పొరను 1.2 యూనిట్లు/మిలీ డిస్పేస్ II ఉపయోగించి 37°C వద్ద 60 నిమిషాల పాటు మెకానికల్ స్క్రాప్ చేయడం ద్వారా తొలగించబడింది. కార్నియల్ ఎండోథెలియల్ మరియు డెస్సెమెట్ మెమ్బ్రేన్ షీట్‌లు శస్త్ర చికిత్సకు పనికిరాని మానవ దాత కాడవెరిక్ కళ్ళ నుండి ఒలిచి, 37°C వద్ద 2 mg/ml కొల్లాజినేస్ II ద్రావణంతో మరియు 2 గంటలకు 5% CO2తో ఎంజైమ్‌గా జీర్ణం చేయబడ్డాయి. ఎండోథెలియల్ కణాల కంటే వేగంగా కట్టుబడి ఉండే ఫైబ్రోబ్లాస్ట్‌లను తొలగించడానికి వివిక్త కణాలు సప్లిమెంట్‌లతో కల్చర్ మాధ్యమంలో తిరిగి అమర్చబడ్డాయి మరియు అన్‌కోటెడ్ కల్చర్‌వేర్‌పై నాలుగు గంటల పాటు పూత పూయబడ్డాయి. ప్రిప్లేటింగ్ తర్వాత, కట్టుబడి లేని కణాలు జెలటిన్ కోటెడ్ డిష్‌లపైకి లేదా వృద్ధి కారకాలతో అనుబంధంగా ఉన్న ఆప్టిమెమ్ మీడియాలో డిన్యూడెడ్ అమ్నియోటిక్ మెమ్బ్రేన్‌పైకి సీడ్ చేయబడ్డాయి. కట్టుబడి మరియు బహుభుజి స్వరూపం కోసం కణాలు మైక్రోస్కోపీ ద్వారా విశ్లేషించబడ్డాయి.
ఫలితాలు: నిరూపితమైన అమ్నియోటిక్ పొర యొక్క మైక్రోస్కోపీ ఎపిథీలియల్ సెల్ అవశేషాలను చూపించలేదు. కార్నియా యొక్క ఎంజైమాటిక్ జీర్ణక్రియ అసెల్యులార్ డెస్సెమెట్ షీట్‌ల వెనుక ఎండోథెలియల్ కణాలు వ్యక్తిగతంగా లేదా సమూహాలలో తేలుతూ మరింత ఫైబ్రోబ్లాస్ట్ ఫ్రీ ఎండోథెలియల్ సెల్ ఐసోలేషన్‌లో ప్రీప్లేటింగ్ సహాయంతో ఉంటాయి. కొన్ని వివిక్త కణాలు అమ్నియోటిక్ పొరపై పరంజాను నిర్వహించాయి మరియు తదుపరి మీడియా భర్తీ సమయంలో ఆ సంశ్లేషణను నిలుపుకున్నాయి.
తీర్మానం: తేలికపాటి ఎంజైమ్ డిస్‌పేస్-IIని ఉపయోగించి HAM యొక్క దీర్ఘకాలిక చికిత్స పొరను నిరాకరిస్తుంది, ఇది సేకరించిన కార్నియల్ ఎండోథెలియల్ కణాలకు విజయవంతమైన పరంజాగా పనిచేస్తుంది. ఈ విధానం ఎండోథెలియల్ సెల్ విస్తరణకు మరియు కార్నియల్ టిష్యూ ఇంజనీరింగ్ అధ్యయనాల కోసం ఇన్ విట్రో మోడల్‌గా ఖర్చుతో కూడుకున్న ప్రత్యామ్నాయంగా మరింత అన్వేషించబడవచ్చు.