జర్నల్ ఆఫ్ క్లినికల్ అండ్ ఎక్స్పెరిమెంటల్ ఆప్తాల్మాలజీ
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

రెటీనాలోని ఒక నవల జన్యువు అయిన ఫాస్ఫోలిపేస్ డొమైన్-కలిగిన 2 (Pnpla2) యొక్క ప్రత్యామ్నాయంగా స్ప్లైస్డ్ వేరియంట్‌ల కోసం శోధిస్తోంది

జాక్వెలిన్ టేలియా డెస్‌జార్డిన్, ఎస్ ప్యాట్రిసియా బెకెరా మరియు ప్రీతి సుబ్రమణియన్

పర్పస్: ఎన్‌సెంబ్ల్ మరియు ఇతర ఎక్స్‌ప్రెస్‌డ్ సీక్వెన్స్ ట్యాగ్ (EST) డేటాబేస్‌లు Pnpla2 , జన్యు ఎన్‌కోడింగ్ పిగ్మెంట్ ఎపిథీలియం-డెరైవ్డ్ ఫ్యాక్టర్-రిసెప్టర్ (PEDF-R) కోసం మౌస్ మరియు ఎలుకలలో పుటేటివ్ ప్రత్యామ్నాయ స్ప్లైస్ వేరియంట్‌లను వెల్లడిస్తాయి. ఈ అధ్యయనం యొక్క ఉద్దేశ్యం మౌస్‌లోని Pnpla2 స్ప్లైస్ వేరియంట్‌ల కోసం ప్రయోగాత్మక సాక్ష్యాలను పొందడం.

పదార్థాలు మరియు పద్ధతులు: ఫోటోరిసెప్టర్లు (661W కణాలు) మరియు మౌస్ కన్ను, గుండె, కొవ్వు, మూత్రపిండాలు మరియు కాలేయ కణజాలాల నుండి తీసుకోబడిన మౌస్ సెల్ లైన్ యొక్క సంస్కృతులు ఉపయోగించబడ్డాయి. మెసెంజర్ RNA (mRNA) కణాలు మరియు కణజాలాల నుండి వేరుచేయబడింది మరియు కాంప్లిమెంటరీ DNA (cDNA) సంశ్లేషణ చేయబడింది. పాలీమరేస్ చైన్ రియాక్షన్ (PCR) ప్రైమర్ జతలు పుటేటివ్ స్ప్లైస్ సైట్‌లను చుట్టుముట్టేలా రూపొందించబడ్డాయి. ఎక్సాన్ మినహాయింపు రియల్ టైమ్ PCR పూర్తి-నిడివి Pnpla2 ట్రాన్స్క్రిప్ట్ యొక్క విస్తరణను తగ్గించడానికి మరియు తక్కువ సమృద్ధిగా ఉన్న స్ప్లైస్ వేరియంట్‌ల విస్తరణను మెరుగుపరచడానికి ఉపయోగించబడింది . PCR ఉత్పత్తులు అగరోజ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా పరిష్కరించబడ్డాయి మరియు UV ట్రాన్సిల్యూమినేటర్‌తో కనుగొనబడ్డాయి. మానవ పూర్తి-నిడివి గల PNPLA2 cDNA లేదా ఎక్సాన్ 5b (E5b) లేని PNPLA2 cDNA కలిగిన రీకాంబినెంట్ ప్లాస్మిడ్‌లు సాంకేతికతలను ధృవీకరించడానికి నియంత్రణలు. 661W కణాల నుండి మొత్తం సెల్ లైసేట్లు తయారు చేయబడ్డాయి. PEDF-R ప్రోటీన్ డిటెక్షన్ వెస్ట్రన్ బ్లాట్‌లను ఉపయోగించి నిర్వహించబడింది.

ఫలితాలు: 661W కణాలు లేదా వివిధ మౌస్ కణజాలాల నుండి పొందిన Pnpla2 ట్రాన్‌స్క్రిప్ట్‌ల కోసం PCR ఉత్పత్తులు బహుళ ప్రైమర్ జతలతో విస్తరించిన తర్వాత ఒకే బ్యాండ్‌గా పరిష్కరించబడతాయి. వివిధ మోలార్ నిష్పత్తులలో రెండు PNPLA2 cDNAల యొక్క ఏకకాల విస్తరణ తక్కువ సమృద్ధిగా ఉన్న ట్రాన్‌స్క్రిప్ట్‌లను గుర్తించకుండా నిరోధించింది. అయినప్పటికీ, ఎక్సాన్ మినహాయింపు పద్ధతిని ఉపయోగించి పూర్తి నిడివి Pnpla2 ట్రాన్స్క్రిప్ట్ కోసం cDNA గణనీయంగా మినహాయించబడినప్పటికీ, Pnpla2 స్ప్లైస్ వేరియంట్‌లకు సంబంధించిన బ్యాండ్‌లు ఏవీ గుర్తించబడలేదు. ఏదేమైనా, రెండు వేర్వేరు ప్రతిరోధకాలతో మొత్తం 661W సెల్ లైసేట్‌ల వెస్ట్రన్ బ్లాట్‌లు PEDF-R ప్రోటీన్ కోసం ఐసోఫామ్‌లను వెల్లడించాయి.

తీర్మానాలు: డేటా ఒకే, పూర్తి-నిడివి గల Pnpla2 ట్రాన్‌స్క్రిప్ట్ ఉనికికి సాక్ష్యాలను అందిస్తుంది , ఇది పోస్ట్ ట్రాన్స్‌లేషన్ ప్రాసెసింగ్‌కు లోనయ్యే ఒకే ప్రోటీన్ ఉత్పత్తికి దారి తీస్తుంది.