ఎంజైమ్ ఇంజనీరింగ్
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

అయస్కాంత వాహకాలపై ఇమ్మొబిలైజేషన్ ద్వారా సైక్లోడెక్స్ట్రిన్ గ్లైకోసైల్ట్రాన్స్ఫేరేస్ యొక్క పునర్వినియోగం

కేట్ క్రిస్టినా బ్లాంకో, ఫ్రాన్సిస్కో జోస్ డోస్ శాంటోస్, నటాలియా సోజా బెర్నార్డి, మిగ్యుల్ జాఫెలికి జూనియర్, రూబెన్స్ మోంటి మరియు జోనాస్ కాంటిరో

బ్రెజిల్‌లోని సావో పాలో రాష్ట్రంలోని కాసావా పిండి మిల్లులోని వ్యర్థ జలాల నుండి వేరుచేయబడిన బాసిల్లస్ లెహెన్సిస్ నుండి CGTase అమ్మోనియం సల్ఫేట్‌తో అవపాతం ఉపయోగించి పాక్షికంగా శుద్ధి చేయబడిన తర్వాత స్థిరీకరించబడింది. పాక్షికంగా శుద్ధి చేయబడిన CGTase ఒక మాగ్నెటైట్ మద్దతుపై సమయోజనీయ బైండింగ్ ద్వారా స్థిరీకరించబడింది, ఇది 3-అమినోప్రొపైల్ట్రిమెథాక్సిసిలేన్‌తో సిలనైజ్ చేయబడింది మరియు గ్లూటరాల్డిహైడ్‌తో సక్రియం చేయబడింది, ఫలితంగా 16.27% దిగుబడి మరియు ప్రారంభ కార్యాచరణలో 17.54% తుది కార్యాచరణ. బాసిల్లస్ లెహెన్సిస్ నుండి సైక్లోడెక్స్ట్రిన్ గ్లైకోసైల్ట్రాన్స్ఫేరేస్ యొక్క భౌతిక రసాయన లక్షణాలు మరియు గతిశాస్త్రం నిర్ణయించబడ్డాయి. స్థిరీకరించబడిన CGTase యొక్క వాంఛనీయ ఉష్ణోగ్రత కరిగే ఎంజైమ్ (వరుసగా 70 ° C మరియు 55 ° C) కంటే ఎక్కువగా ఉంది. స్థిరమైన ఎంజైమ్ యొక్క వాంఛనీయ pH కరిగే ఎంజైమ్ (pH 8.0) వలె ఉంటుంది. pH మరియు థర్మో స్టెబిలిటీ అస్సేస్‌లో, 50% ఎంజైమ్ కార్యాచరణ 24 h తర్వాత నిర్వహించబడుతుంది మరియు 26.22% ప్రారంభ కార్యాచరణ వరుసగా 160 నిమిషాల తర్వాత అలాగే ఉంచబడింది. Michaelis-Menten స్థిరాంకం 0.82 mg.ml-1 మరియు గరిష్ట వేగం 45.45 mol.ml−1.min−1. నాలుగు చక్రాల తర్వాత స్థిరీకరించబడిన ఎంజైమ్ యొక్క పునర్వినియోగ అధ్యయనంలో, ప్రారంభ ఉత్ప్రేరక చర్యలో 16.66% నిర్వహించబడింది, ఇది మాగ్నెటైట్‌పై స్థిరీకరించబడిన ఎంజైమ్‌ను తిరిగి పొందగల మరియు తిరిగి ఉపయోగించగల సామర్థ్యాన్ని ప్రదర్శిస్తుంది.