మెడికల్ డయాగ్నస్టిక్ మెథడ్స్ జర్నల్
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

స్పెర్మ్ క్రోమాటిన్ స్ట్రక్చర్ అస్సే (SCSA) యొక్క పునః మూల్యాంకనం

సతోరు కనేకో, కియోషి తకమత్సు

అక్రిడిన్ ఆరెంజ్ (AO) యొక్క పాలీక్రోమాటిక్ ఫ్లోరోసెన్స్ ఆధారంగా స్పెర్మ్ క్రోమాటిన్ స్ట్రక్చర్ అస్సే (SCSA) మానవ స్పెర్మ్ న్యూక్లియైలలో DNA నష్టాలను గమనించడానికి విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది. SCSA యొక్క సూత్రాన్ని తిరిగి మూల్యాంకనం చేయడానికి, ప్రతికూల DNA ఫ్రాగ్మెంటేషన్ రేటు 87% ఉన్న మానవ మోటైల్ స్పెర్మ్‌ను ప్రతికూల నియంత్రణ (NC) మరియు పాజిటివ్ కంట్రోల్ (PC) NC యొక్క హీట్ డీనాటరేషన్ ద్వారా తయారు చేయడం ద్వారా తయారు చేయబడింది. నియంత్రణల కోసం AO స్టెయిన్‌బిలిటీని మైక్రోస్కోపిక్, ఎలెక్ట్రోఫోరేటిక్ మరియు ఫ్లో సైటోమెట్రిక్ పరిశీలనల ఆధారంగా పోల్చారు. పెర్కాల్ డెన్సిటీ గ్రేడియంట్ సెంట్రిఫ్యూగేషన్ మరియు తదుపరి ఈత ద్వారా మానవ మోటైల్ స్పెర్మ్ వేరు చేయబడింది. అప్పుడు, సింగిల్-సెల్ పల్స్-ఫీల్డ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ సహాయంతో DNA ఫ్రాగ్మెంటేషన్ గమనించబడింది.

ఉత్తేజిత తరంగదైర్ఘ్యంపై ఆధారపడి AO అణువు ఎరుపు మరియు ఆకుపచ్చ ఫ్లోరోసెన్స్‌ను విడుదల చేస్తుందని మేము కనుగొన్నాము. ట్రిప్సిన్‌తో ఇన్-జెల్ జీర్ణక్రియ తర్వాత AO గాఢత పెరగడం మరియు ఎరుపు ఫ్లోరోసెన్స్ లేకపోవడంతో రెండు నియంత్రణలు ఆకుపచ్చ నుండి ఎరుపు రంగుకు మార్చబడ్డాయి. ఫోటో-బ్లీచింగ్ సమయంలో NC యొక్క రంగు ఎరుపు నుండి ఆకుపచ్చకి మరియు DNA ఫ్రాగ్మెంటేషన్ ఏకకాలంలో కొనసాగింది. NC మరియు PC యొక్క సైటోగ్రామ్‌లు ఒకదానికొకటి సమానంగా ఉన్నాయి. ఈ వాస్తవాలు SCSA సూత్రానికి విరుద్ధంగా ఉన్నాయి. ఆకుపచ్చ మరియు ఎరుపు ఫ్లోరోసెన్స్‌లు వరుసగా DNAలోకి AO మరియు ప్రోటీన్‌లకు AO శోషణం చేయడం వల్ల విడుదలయ్యాయి మరియు వాటి విలీనం రంగు వైవిధ్యానికి దారితీసింది. ఫోటో-బ్లీచింగ్ సమయంలో ఎరుపు నుండి ఆకుపచ్చకి రంగు మారడం గమనించవచ్చు, ఎందుకంటే AO యొక్క శోషణ నుండి కొన్ని ప్రోటీన్‌లకు ఎరుపు ఫ్లోరోసెన్స్ కంటే ఇంటర్‌కలేటెడ్ AO నుండి ఆకుపచ్చ ఫ్లోరోసెన్స్ రియాక్టివ్ ఆక్సిజన్ జాతులకు ఎక్కువ సహనం కలిగి ఉంటుంది. మొత్తంమీద, SCSA మానవ స్పెర్మ్ న్యూక్లియస్‌లో DNA నష్టాన్ని గుర్తించలేదు.