ఎంజైమ్ ఇంజనీరింగ్
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

ఐసోలేషన్, ప్యూరిఫికేషన్ అండ్ క్యారెక్టరైజేషన్ ఆఫ్ సెకండరీ స్ట్రక్చర్ మరియు ఇండియన్ మేజర్ కార్ప్, కాట్లా కాట్లా (కాట్లా) నుండి లిపేస్ యొక్క కైనెటిక్ స్టడీ

కామేశ్వర్ శర్మ YVR, నీలిమ బూరా మరియు ప్రసిద్ధి త్యాగి

లైపేస్‌లు సర్వవ్యాప్త ఎంజైమ్‌లు, ఇవి కొవ్వుల జలవిశ్లేషణను కొవ్వు ఆమ్లాలు మరియు గ్లిసరాల్‌గా వాటర్‌లిపిడ్ ఇంటర్‌ఫేస్‌లో ఉత్ప్రేరకపరుస్తాయి మరియు నాన్-సజల మాధ్యమంలో ప్రతిచర్యను తిప్పికొడతాయి. ఒలియోకెమిస్ట్రీ, ఆర్గానిక్ సింథసిస్, డిటర్జెంట్ ఫార్ములేషన్ మరియు న్యూట్రిషన్‌లో వాటి నవల మరియు మల్టీఫోల్డ్ అప్లికేషన్‌ల కారణంగా లైపేస్‌లు బయోకెటలిస్ట్‌లలో ప్రముఖ స్థానాన్ని ఆక్రమించాయి. లైపేస్ క్యాట్లా కాట్లా (కాట్లా) యొక్క అలిమెంటరీ కెనాల్ మరియు డైజెస్టివ్ గట్ నుండి సంగ్రహించబడింది మరియు వేరుచేయబడింది. ప్రారంభ బఫర్‌తో (0.01 M TrisHCl, pH 7.2) కణజాలం 1:3 నిష్పత్తిలో సజాతీయంగా మార్చబడింది. ఈ విధంగా పొందిన ముడి సారం అమ్మోనియం సల్ఫేట్ (20-80%) ఉపయోగించి అవక్షేపించబడింది. డయాలసిస్ ద్వారా అదనపు ఉప్పు తొలగించబడింది మరియు ఫలితంగా డయాలిసేట్ (డీసాల్టెడ్ ఎంజైమ్) 0.5 ml/min ప్రవాహం రేటుతో అయాన్ ఎక్స్ఛేంజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ కోసం DEAE-సెల్యులోజ్ కాలమ్‌కు లోబడి ఉంటుంది. ప్రారంభ బఫర్‌లో NaCl (100-800 mM) యొక్క స్టెప్ గ్రేడియంట్ ద్వారా ఎలుషన్ నిర్వహించబడింది. క్రియాశీల భిన్నాలు ప్యూరిఫైడ్ ఫ్రాక్షన్ (PF)గా పూల్ చేయబడ్డాయి మరియు pH, ఉష్ణోగ్రత మరియు ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలపై కాల్షియం యొక్క భౌతిక లక్షణం, నిర్మాణాత్మక లక్షణం, పరమాణు లక్షణాలు మరియు గతి అధ్యయనాల కోసం ఉపయోగించబడ్డాయి. ప్యూరిఫైడ్ ఫ్రాక్షన్ (PF) 1438.72 U/mg తుది నిర్దిష్ట కార్యాచరణను చూపింది. వాంఛనీయ pH 7.8 మరియు వాంఛనీయ ఉష్ణోగ్రత 20ËšC ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది. ద్రవీభవన ఉష్ణోగ్రత (Tm) విలువ 42ËšC మరియు శుద్ధి చేయబడిన లిపేస్ యొక్క క్రియాశీలత శక్తి 34.82 KJ/mol/K. లిపేస్ యొక్క ఉష్ణ స్థిరత్వం 20ËšC వద్ద ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది. ప్రారంభ బఫర్‌లో 10 mM మరియు 20 mM CaCl2తో 3 h వరకు లైపేస్ యాక్టివిటీ నిలుపుకుంది. ఎంజైమ్ యొక్క డీనాటరేషన్ నుండి కాల్షియం గుణాన్ని పెంచుతుందని ఇది చూపిస్తుంది. పిఎన్‌పిపి యొక్క జలవిశ్లేషణ కోసం ఇండియన్ మేజర్ కార్ప్, క్యాట్లా నుండి లైపేస్ యొక్క మైఖెలిస్-మెంటేన్ స్థిరాంకం (కిమీ) 6.695 mM. లిపేస్ (కాట్లా) యొక్క టర్నోవర్ సంఖ్య (kcat) 0.0022 s-1. లైపేస్ యొక్క ఉత్ప్రేరక సామర్థ్యం (kcat/Km) 0.0003412 s-1 mM-1. శుద్ధి చేయబడిన లిపేస్ (PF) యొక్క SDS-PAGE 70 kDa పరమాణు ద్రవ్యరాశితో సజాతీయ సింగిల్ బ్యాండ్‌ను వెల్లడించింది. α హెలిక్స్ మరియు β శుద్ధి చేసిన లిపేస్ యొక్క ద్వితీయ నిర్మాణ అమరిక వరుసగా వృత్తాకార డైక్రోయిజంను ఉపయోగించి 48.51% మరియు 9.74% ఫలితాలను ఇస్తుంది.