మెడికల్ డయాగ్నస్టిక్ మెథడ్స్ జర్నల్
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

అనుమానిత సెప్టిసిమియాలో ప్లాస్మా సెల్-ఫ్రీ DNA విశ్లేషణ కోసం క్లినికల్ లాబొరేటరీ పద్ధతుల మూల్యాంకనం

యురోసెవిక్ ఎన్, ఇంగ్లిస్ టిజెజె, గ్రాస్కో జె మరియు లిమ్ ఇఎమ్

నేపధ్యం: ప్లాస్మా సెల్ ఫ్రీ DNA (cfDNA) మొత్తం మరియు నాణ్యత విపరీతమైన శారీరక మరియు రోగలక్షణ పరిస్థితులలో మారుతుంది. ఈ మార్పులు గర్భం, క్యాన్సర్, అవయవ మార్పిడి మరియు సెప్టిసిమియా వంటి విభిన్న పరిస్థితులలో ఒక నవల ప్రోగ్నోస్టిక్ బయోమార్కర్‌కు ఆధారాన్ని అందించగలవు. మెడికల్ డయాగ్నస్టిక్స్‌కు ఉత్తమమైన ఆచరణాత్మక విధానాన్ని గుర్తించడానికి cfDNA విశ్లేషణ కోసం ప్రస్తుత పద్ధతుల మూల్యాంకనం అవసరం.

పద్ధతులు: ప్రారంభంలో, QIAamp సర్క్యులేటింగ్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ మరియు QI Aamp మినీ బ్లడ్ DNA కిట్‌లు రెండింటినీ ఉపయోగించి జ్వరసంబంధమైన వ్యాధితో బాధపడుతున్న తొమ్మిది మంది రోగుల ప్లాస్మా నుండి cf DNA సేకరించబడింది. PerfeCta మరియు AmpliTaq మిశ్రమాలను ఉపయోగించి β-గ్లోబిన్ qPCR ద్వారా CfDNA ఏకాగ్రత నిర్ణయించబడింది. తదనంతరం, అనుమానిత సెప్టిసిమియా మరియు పాజిటివ్ బ్లడ్ కల్చర్ ఉన్న 64 మంది అదనపు రోగుల నుండి ప్లాస్మా cfDNAని విశ్లేషించడానికి Qubit ఫ్లోరిమెట్రిక్ మరియు జెల్-ఆన్-ఎ-చిప్ పరీక్షలు ఉపయోగించబడ్డాయి.

ఫలితాలు: AmpliTaq మిశ్రమాన్ని ఉపయోగించి β-గ్లోబిన్ జన్యువు qPCR ద్వారా CfDNA ఏకాగ్రతను నిర్ణయించడం PerfeCta qPCR కంటే మెరుగైనది. అంతేకాకుండా, PerfeCta AmpliTaq qPCR వలె కాకుండా DNA వెలికితీత పద్ధతి ద్వారా వేరుచేయబడిన cfDNAలో సారూప్య జన్యు సమానమైన కాపీ సంఖ్యలను నిర్ణయించింది. QIAamp మినీ బ్లడ్ కిట్ మరియు AmpliTaq qPCR వరుసగా cfDNA సొలేషన్ మరియు క్వాంటిఫికేషన్ కోసం ఒక పెద్ద భావి అధ్యయనంలో ఉపయోగించబడ్డాయి. అయినప్పటికీ, రెండు పద్ధతుల మధ్య మంచి సహసంబంధం ఉన్నప్పటికీ Qubit (అంటే వరుసగా 22.23 ng/mL vs. 61.38 ng/mL) ద్వారా ప్రత్యక్ష DNA కొలతతో పోల్చినప్పుడు అధిక ప్లాస్మా cfDNA స్థాయిలను గుర్తించడానికి qPCR తక్కువగా సరిపోతుంది. DNA మైక్రోఫ్లూయిడ్ చిప్ పద్ధతి cfDNA శకలాలు పరిమాణాలు మరియు మొత్తం cfDNA తో బలమైన సానుకూల సహసంబంధం కలిగిన న్యూక్లియోజోమ్-పరిమాణ DNA శకలాలు ఉనికిని బహిర్గతం చేసే వాటి సాపేక్ష సాంద్రతలను నిర్ణయించడానికి ఉపయోగించబడింది. ఇంకా, అధిక cfDNA కంటెంట్‌తో ప్లాస్మాలో అపోప్టోటిక్ DNA ప్రధాన DNA భాగంగా గుర్తించబడింది.

తీర్మానాలు: β-గ్లోబిన్ qPCR తక్కువ ప్లాస్మా cfDNA సాంద్రతలను గుర్తించడానికి మరింత అనుకూలంగా ఉంటుంది, అయితే అధిక ప్లాస్మా సాంద్రతలను వేగంగా గుర్తించడానికి Qubit పరీక్ష ఉత్తమ ఎంపిక. DNA చిప్ విశ్లేషణ ఆధారంగా అధిక cfDNA సాంద్రతలతో ప్లాస్మాలో cfDNA యొక్క ప్రధాన మూలం అపోప్టోసిస్.