జర్నల్ ఆఫ్ క్లినికల్ అండ్ ఎక్స్పెరిమెంటల్ ఆప్తాల్మాలజీ
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

కెరాటోసైట్ లినేజ్ ఇన్ విట్రోలో మానవ కొవ్వు-ఉత్పన్న మూలకణాల భేదం

షిజియా జాంగ్, లాడాన్ ఎస్పాండర్, కాథ్లీన్ MP ఇమ్‌హోఫ్ మరియు బ్రూస్ A. బన్నెల్

పర్పస్: విట్రోలోని ప్రైమరీ కెరాటోసైట్‌లతో సహ-సంస్కృతి ద్వారా కెరాటోసైట్ వంశానికి మానవ కొవ్వు-ఉత్పన్న మూలకణాల (hASCలు) భేదాన్ని అంచనా వేయడానికి .
మెటీరియల్స్ మరియు మెథడ్స్: కెరాటోసైట్ డిఫరెన్సియేటింగ్ మీడియం (KDM)లో దిగువన hASCలను మరియు పైన కెరాటోసైట్‌లను పెంచడానికి ట్రాన్స్‌వెల్ ఇన్సర్ట్‌లను ఉపయోగించే సహ-సంస్కృతి వ్యవస్థ అభివృద్ధి చేయబడింది. పూర్తి సంస్కృతి మాధ్యమం (CCM) మరియు KDMలలో కల్చర్ చేయబడిన hASCలు నియంత్రణగా ఉపయోగించబడ్డాయి. 16 రోజుల తరువాత, సెల్ కౌంట్ ద్వారా పదనిర్మాణ మార్పులు మరియు విస్తరణ కోసం hASC లు పరిశీలించబడ్డాయి. ఆల్డిహైడ్ డీహైడ్రోజినేస్ 3 కుటుంబం, సభ్యుడు A1 (ALDH3A1) మరియు కెరాటోకాన్ యొక్క వ్యక్తీకరణను గుర్తించడానికి qRT-PCR మరియు ఫ్లో సైటోమెట్రీ ఉపయోగించబడ్డాయి.
ఫలితాలు: CCM మరియు KDM లకు సంబంధించి సహ-సంస్కృతి వ్యవస్థలో hASCలు మరింత డెన్డ్రిటిక్ మరియు పొడుగుగా మారాయి. భేదం అభివృద్ధి చెందుతున్నందున కణాల రెట్టింపు సమయం ఎక్కువ. qRT-PCR గణాంకపరంగా ముఖ్యమైనది కాని p-విలువలు ఉన్నప్పటికీ సహ-సంస్కృతి వ్యవస్థలో ALDH3A1 మరియు కెరాటోకాన్ రెండింటి యొక్క వ్యక్తీకరణపై ఖచ్చితమైన ధోరణిని చూపించింది. ఫ్లో సైటోమెట్రీ CCM సమూహం (p <0.001)కి సంబంధించి సహ-సంస్కృతి వ్యవస్థలో ALDH3A1 మరియు కెరాటోకాన్ యొక్క ప్రోటీన్ స్థాయిలను గణనీయంగా పెంచింది మరియు KDM సమూహానికి సంబంధించి కూడా (ALDH3A1 కోసం p <0.001 మరియు కెరాటోకాన్ కోసం p <0.01).
తీర్మానం: సహ-సంస్కృతి పద్ధతి అనేది వివో అప్లికేషన్‌లకు ముందు మూలకణ జనాభా యొక్క భేదాన్ని ప్రేరేపించడానికి ఒక మంచి విధానం. ఈ అధ్యయనం ఆటోలోగస్ బహుళ-సంభావ్య మూలకణాలను ఉపయోగించి కార్నియల్ కణజాలం యొక్క బయోఇంజనీరింగ్‌కు ఒక ముఖ్యమైన సామర్థ్యాన్ని వెల్లడిస్తుంది.