జర్నల్ ఆఫ్ అప్లైడ్ ఫార్మసీ
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

Sf9 కీటకాల కణాలలో PORతో జన్యుపరంగా ఇంజనీరింగ్ చేయబడిన Cyt b5-CYP3A4 ఫ్యూజన్ ప్రోటీన్ యొక్క కో ఎక్స్‌ప్రెషన్ మరియు విట్రోలో వ్యక్తీకరించబడిన ఉత్పత్తుల యొక్క క్రియాత్మక లక్షణం

జాంగ్మింగ్ క్సీ, షబ్బీర్ అహ్మద్, వెన్హుయ్ లియు, సిసి కాంగ్, యింగ్చున్ జు, టింగ్ లియు మరియు షుకింగ్ చెన్

హ్యూమన్ సైటోక్రోమ్ P450 3A4 (CYP3A4) అనేది కాలేయంలో అత్యంత సమృద్ధిగా ఉండే దశ I డ్రగ్-మెటబోలైజింగ్ ఎంజైమ్, మరియు మార్కెట్‌లోని దాదాపు 50% మందులు CYP3A4 ద్వారా జీవక్రియ చేయబడతాయి. అందువల్ల, అనేక ఇన్ విట్రో అధ్యయనాలు వివోలో సంభావ్య డ్రగ్-డ్రగ్ ఇంటరాక్షన్‌లను (DDIలు) అంచనా వేయడానికి స్క్రీనింగ్ సాధనంగా రీకాంబినెంట్ CYP3A4పై ఆధారపడి ఉన్నాయి. అయినప్పటికీ, అధిక ఉత్ప్రేరక చర్యతో రీకాంబినెంట్ CYP3A4 గురించి పరిమిత సమాచారం అందుబాటులో ఉంది. కాబట్టి, ప్రస్తుత అధ్యయనం అధిక ఉత్ప్రేరక చర్యతో రీకాంబినెంట్ CYP3A4ని పొందడం మరియు విట్రోలో దాని విధులను వర్గీకరించడం లక్ష్యంగా పెట్టుకుంది. విజాతీయంగా వ్యక్తీకరించబడిన CYP3A4 యొక్క ఉత్ప్రేరక చర్యలను మెరుగుపరచడానికి, ఎంజైమ్ సైటోక్రోమ్ b5 (b5) తోక-నుండి-తలకి సంలీనం చేయబడింది మరియు ఏకకాల వ్యక్తీకరణను సాధించడానికి ఫ్యూజ్డ్ ఎంజైమ్ NADPH-P450 రిడక్టేజ్ (POR)తో కలిపి ఒకే ప్లాస్మిడ్‌లోకి చేర్చబడింది. sf9 కణాలలో. ఇక్కడ, సబ్‌స్ట్రేట్ బైండింగ్ అనుబంధాలు, ఎంజైమాటిక్ కార్యకలాపాలు మరియు ఫ్యూజ్డ్ ఎంజైమ్ యొక్క ఇన్ విట్రో DDIలలో అప్లికేషన్‌లు పరిశోధించబడ్డాయి. POR-cyt b5CYP3A4 యొక్క డిస్సోసియేషన్ స్థిరాంకం Kd 8.3 ± 0.87 μmol/L, క్లింట్ (క్లింట్=Vmax/Km) టెస్టోస్టెరాన్ మరియు m150 యొక్క జీవక్రియలో POR-cyt b5CYP3A4 కోసం 8.57 mL/min/g ప్రోటీన్. మిడాజోలం కోసం గ్రా ప్రోటీన్. అదనంగా, టెస్టోస్టెరాన్ జీవక్రియపై కీటోకానజోల్ యొక్క నిరోధక స్థిరాంకం 0.013 ± 0.0038 μmol/L. ప్రస్తుత ఫలితాలు ఫ్యూజ్డ్ ఎంజైమ్‌కు సబ్‌స్ట్రేట్ బైండింగ్ అనుబంధాన్ని మరియు ఎంజైమాటిక్ కార్యకలాపాలను గణనీయంగా పెంచాలని సూచించాయి. అందువల్ల, CYP3A4 ఇన్ విట్రోతో అనుబంధించబడిన ఔషధ జీవక్రియలు మరియు DDIల పరిశోధనలను అధ్యయనం చేయడానికి ఈ నిర్మాణం సహాయకరంగా ఉంటుంది. అదనంగా, ఫ్యూజ్డ్ ఎంజైమ్ మరియు POR యొక్క ఏకకాల వ్యక్తీకరణ CYP3A4/POR/b5 యొక్క మరింత స్థిరమైన మోలార్ నిష్పత్తి ఆధారంగా మరింత పునరుత్పాదక ఫలితాలను అందిస్తుంది.