యాంటీవైరల్స్ & యాంటీరెట్రోవైరల్స్ జర్నల్
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

క్షీరద కణ రేఖలలో పూర్తి పొడవు మరియు ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ డొమైన్ EBOV గ్లైకోప్రొటీన్ యొక్క రీకాంబినెంట్ ఫారమ్‌ల క్లోనింగ్, వ్యక్తీకరణ మరియు శుద్ధీకరణ

మిసాకి వాయెంగెరా, పీస్ బాబిర్యే, కరోల్ ముసుబికా, శామ్యూల్ కిరిముండా, మోసెస్ ఎల్. జోలోబా

నేపధ్యం: ఫుల్ లెంగ్త్ ఎబోలావైరస్ గ్లైకోప్రొటీన్ (GP) స్పైక్‌లను ఏర్పరచడానికి బయటి అత్యంత లిపిడ్ పొరను విడదీస్తుంది, ఇక్కడ ఇది వైరస్-హోస్ట్ సెల్ పరస్పర చర్యకు మధ్యవర్తిత్వం చేస్తుంది. GP (sGP) యొక్క రహస్య రూపం మొత్తం 5 తెలిసిన ఎబోలావైరస్ జాతులచే కూడా ఉత్పత్తి చేయబడుతుంది. ఈ లక్షణాలు GPని ఎబోలావైరస్ యొక్క పరిశోధన మరియు అభివృద్ధికి (R మరియు D) ఆదర్శవంతమైన లక్ష్యంగా చేస్తాయి మరియు బహుశా పాన్-ఫిలోవైరస్ టార్గెటెడ్ రాపిడ్ డయాగ్నస్టిక్ టెస్ట్‌లు (RDTలు), బయో-థెరప్యూటిక్స్ మరియు టీకాలు. రీకాంబినెంట్ జైర్ ఎబోలావైరస్ ( EBOV ) GP యొక్క పూర్వ క్లోనింగ్ కీటకాల ( బాకులోవైరస్ ) వ్యక్తీకరణ వ్యవస్థలను ఎక్కువగా ఉపయోగించింది . క్షీరద సెల్-లైన్‌లలో రీకాంబినెంట్ EBOV GP యొక్క పూర్తి నిడివి మరియు ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ డొమైన్ (ECD) రూపాల క్లోనింగ్, వ్యక్తీకరణ మరియు శుద్దీకరణను మేము నివేదిస్తాము.

పద్ధతులు మరియు ఫలితాలు: 2034 మరియు 1956 బేస్-పెయిర్ (bp) కోడింగ్ DNA సీక్వెన్సులు 669 మరియు 643 అమైనో ఆమ్లాలు (aa) పూర్తి పొడవు యొక్క అవశేషాలు మరియు EBOV GP యొక్క ECD రూపాలు pTGE ప్లాస్మిడ్‌లలోకి ఉప-క్లోన్ చేయబడ్డాయి. సీరం లేని ఫ్రీస్టైల్ TM 293 ఎక్స్‌ప్రెషన్ మీడియంలో పెరిగిన 293-6E HEK క్షీరద కణాలను బదిలీ చేయడానికి రీకాంబినెంట్ pTGE-ప్లాస్మిడ్‌లు ఉపయోగించబడ్డాయి. సెల్ లైసేట్‌లు మరియు లేదా కల్చర్ సూపర్‌నాటెంట్‌లు శుద్ధి చేయబడిన ప్రోటీన్‌ను పొందేందుకు ఉపయోగించబడ్డాయి, తర్వాత SDS-PAGE మరియు వెస్ట్రన్ బ్లాట్‌లపై విశ్లేషణ జరిగింది. వెస్ట్రన్ బ్లాట్‌పై ~100 kDa (Cal.MW~71.67 kDa) అంచనా వేసిన పరమాణు బరువుతో సెల్ లైసేట్‌లలో మెమ్బ్రేన్ బౌండ్ ప్రోటీన్‌గా శుద్ధి చేయబడిన పూర్తి నిడివి GP కనుగొనబడింది; మరియు 0.02 mg GP (ఏకాగ్రత: 0.2 mg/mL, స్వచ్ఛత: ~50%) ఉద్భవించింది. దీనికి విరుద్ధంగా, ECD GP SDS-PAGE మరియు వెస్ట్రన్ బ్లాట్ ఆధారంగా ~116 kDa యొక్క అంచనా పరమాణు బరువులతో సెల్ కల్చర్ రసం యొక్క సూపర్‌నాటెంట్లలో కనుగొనబడింది; మరియు GP_ECD యొక్క 1.6 mg (ఏకాగ్రత: 0.4 mg/ml, స్వచ్ఛత: ~70%) పొందబడింది.

తీర్మానం: క్షీరద కణాలలో, రీకాంబినెంట్ ఫుల్ లెంగ్త్ EBOV GP ప్రధానంగా ట్రాన్స్‌మెంబ్రేన్ ప్రోటీన్ (tGP)గా వ్యక్తీకరించబడుతుంది, అయితే ECD GP సంస్కృతి మాధ్యమంలోకి మార్చబడుతుంది. వేగవంతమైన రోగనిర్ధారణ పరీక్షల (RDTలు) R మరియు D లకు GP యొక్క రెండు రీకాంబినెంట్ రూపాలు కీలకం.