ప్రోబయోటిక్స్ & హెల్త్ జర్నల్
అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

ఫ్లోరోసెంట్ స్టెయినింగ్ మరియు ఫ్లోరోసెన్స్ మైక్రోస్కోపీ ద్వారా ప్రోబయోటిక్ లాక్టోబాసిల్లస్ అసిడోఫిలస్ యొక్క సెల్ వాల్ సమగ్రత మరియు ప్రోటోప్లాస్ట్ ఫార్మేషన్

ర్యాన్ పేజ్, డేవిడ్ బర్క్, కయానుష్ ఆర్యనా

బ్యాక్టీరియా కణాల ప్రోటోప్లాస్ట్ యొక్క గుర్తింపు గతంలో దశ కాంట్రాస్ట్ మైక్రోస్కోపీని ఉపయోగించింది. ఈ పద్ధతి ప్రోటోప్లాస్ట్‌ను వాటి పరిమాణం మరియు ఆకృతిలో మార్పు ద్వారా నిర్ణయిస్తుంది. నిర్దిష్ట సెల్యులార్ భాగాలను లక్ష్యంగా చేసుకునే ఫ్లోరోసెంట్ స్టెయిన్‌లను ఉపయోగించి మరింత ధృవీకరించదగిన పద్ధతిని ఉపయోగించవచ్చు. సెల్ వాల్ డైజెస్టివ్ ఎంజైమ్‌లకు గురైన తర్వాత, ప్రోబయోటిక్ లాక్టోబాసిల్లస్ అసిడోఫిలస్‌లో బ్యాక్టీరియా కణ గోడల ఉనికి లేదా లేకపోవడాన్ని గుర్తించడానికి ఫ్లోరోసెన్స్ మైక్రోస్కోపీ పద్ధతులను ఉపయోగించడం ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం . బాక్టీరియల్ కణాలు లైసోజైమ్ [0, 175, 250, 425 μg/ml] యొక్క వివిధ సాంద్రతలతో చికిత్స చేయబడ్డాయి మరియు పది నిమిషాల పాటు 37 ° C వద్ద పొదిగేవి. కింది లైసోజైమ్ చికిత్స కణాలు గోధుమ-జెర్మ్ అగ్లుటినిన్ ( WGA ) ^{మరియు} హోచ్‌స్ట్ 33342 యొక్క విభిన్న సాంద్రతలతో (1x, 2x, 10x, మరియు 100x) ఫ్లోరోసెంట్‌గా మరకలు చేయబడ్డాయి. ఎంపిక చేయడానికి ఉపయోగించబడింది సెల్ గోడ యొక్క పెప్టిడోగ్లైకాన్ పొర యొక్క అవశేషాలకు కట్టుబడి ఉంటుంది మరియు బ్లూ ఫ్లోరోసెంట్ డై అయిన హోచ్స్ట్ 33342, బ్యాక్టీరియా కణాల డబుల్ స్ట్రాండెడ్ DNA యొక్క న్యూక్లియిక్ ఆమ్లాలకు ప్రత్యేకంగా బంధించడానికి ఉపయోగించబడింది. ఫ్లోరోసెన్స్ మైక్రోస్కోపీ కోసం నమూనా తయారీకి ప్రామాణిక పద్ధతి అనుసరించబడింది. ప్రతి లైసోజైమ్ మరియు స్టెయిన్ కాంబినేషన్ కోసం మూడు ఫీల్డ్‌లు అధ్యయనం చేయబడ్డాయి. లైసోజైమ్ సాంద్రతలలో తేడాలను గుర్తించడానికి ఒక-మార్గం ANOVA నిర్వహించబడింది. p-విలువ <0.05 గణనీయంగా భిన్నంగా గుర్తించబడింది. సెల్ గోడ నిర్మాణ సమగ్రత 175 మరియు 250 μg/ml లైసోజైమ్ మరియు సెల్ లైసిస్ వద్ద క్షీణించడం ప్రారంభమైంది మరియు DNA యొక్క స్ట్రైయేషన్స్ 425 μg/ml గాఢత వద్ద పెరిగాయి. 175 μg/ml లైసోజైమ్ సాంద్రత సగటున 41% ప్రోటోప్లాస్ట్ లేదా సెల్ గోడ యొక్క పాక్షిక జీర్ణక్రియను ఉత్పత్తి చేస్తుంది. లైసోజైమ్ యొక్క 175 నుండి 250 μg/ml గాఢత పెరగడం వలన ప్రోటోప్లాస్ట్ యొక్క సగటు శాతం తగ్గింది (4%). 425 μg/ml గాఢత వద్ద, ప్రోటోప్లాస్ట్ యొక్క సగటు శాతం 1%కి తగ్గింది, అదే సమయంలో DNA యొక్క స్ట్రైషన్స్‌లో పెరుగుదలను కూడా చూపుతుంది. 1x రంగు ఏకాగ్రత వద్ద, సెల్ గోడ యొక్క పాక్షిక మరక గమనించబడింది. 2x వద్ద, సెల్ గోడ యొక్క పూర్తి మరక రికార్డ్ చేయబడింది. 10x వద్ద, రంగుల యొక్క గణనీయమైన సంతృప్తత లేకుండా 2x వద్ద రంగు సాంద్రతల మాదిరిగానే సెల్ వాల్ మరియు న్యూక్లియైల పూర్తి మరకలు గమనించబడ్డాయి. 100x వద్ద రంగు ఏకాగ్రత సెల్ గోడ మరియు న్యూక్లియైలలోని రంగుల యొక్క అధిక సంతృప్తతను ఉత్పత్తి చేస్తుంది, దీని వలన వాటిని మిళితం చేస్తుంది మరియు బ్యాక్టీరియా కణాలు మరియు ప్రోటోప్లాస్ట్‌లను గుర్తించే సామర్థ్యాన్ని నిరోధిస్తుంది. సెల్ గోడ మరియు కేంద్రకం యొక్క పూర్తి మరక కోసం 2x అత్యంత అనుకూలమైనది. రంగు యొక్క ఏకాగ్రత పెరిగినందున నేపథ్య ఫ్లోరోసెన్స్ శబ్దం గమనించబడింది. లాక్టోబాసిల్లస్ అసిడోఫిలస్‌లో , సెల్ గోడ జీర్ణక్రియకు 175 μg/ml లైసోజైమ్ సాంద్రత సరిపోతుంది . తక్కువ మొత్తంలో బ్యాక్‌గ్రౌండ్ నాయిస్‌తో డై ఏకాగ్రత యొక్క సమర్థత 2x వద్ద ఉత్తమంగా ఉంటుంది.