జర్నల్ ఆఫ్ ఫిజికల్ కెమిస్ట్రీ & బయోఫిజిక్స్
అందరికి ప్రవేశం
ISSN: 2161-0398
ISSN: 2161-0398
కార్స్టన్ జైలింగర్
MjK2 E. కోలి కణాలలో N-లేదా C-టెర్మినల్ యాంటీబాడీ బైండింగ్ సైట్ మరియు హిస్టిడిన్‌హెక్సామర్‌ను కలిగి ఉన్న ఫ్యూజన్ ప్రోటీన్‌గా వ్యక్తీకరించబడింది . C-టెర్మినల్ ట్యాగ్ చేయబడిన ఫ్యూజన్ ప్రోటీన్ p34 kDa వద్ద అదనపు కరిగే RCK డొమైన్ యొక్క వ్యక్తీకరణ మరియు శుద్దీకరణను అనుమతిస్తుంది, అయితే N-టెర్మినల్ ట్యాగ్ చేయబడిన నిర్మాణాన్ని ఉపయోగించినప్పుడు ఈ అదనపు RCK డొమైన్ పోయింది. శుద్ధి చేయబడిన N- టెర్మినల్ ట్యాగ్ చేయబడిన ఛానెల్ మోనోమర్ నుండి ఫ్యూజన్ పెప్టైడ్‌ను తొలగించిన తర్వాత, సింథటిక్ లిపిడ్‌తో పొదిగినప్పుడు MjK2 స్థిరమైన టెట్రామర్‌గా ఏర్పడింది. సింగిల్ ఛానల్ రికార్డింగ్ ద్వారా లేదా పొటాషియం సెన్సింగ్ డై, PBFIతో ఆప్టికల్ అస్సే ద్వారా లైపోజోమ్‌లుగా పునర్నిర్మించిన తర్వాత ఛానెల్ కార్యాచరణ అధ్యయనం చేయబడింది. మొదట ఒకే ఛానెల్ రికార్డింగ్ ద్వారా ఛానెల్ ఫంక్షన్ మెరుగుపరచబడింది. సింగిల్ ఛానల్ రికార్డింగ్ 42, 70, 85 మరియు 202 pS యొక్క సింగిల్ ఛానల్ కండక్టెన్స్‌లతో ఛానెల్ కార్యాచరణ యొక్క pH ఆధారపడటాన్ని నిర్ధారించింది మరియు ఫంక్షనల్ K+ ఛానెల్ ఏర్పడిందని సూచించింది. ఒక ఆప్టికల్ అస్సేలో పునర్నిర్మించిన MjK2 కార్యాచరణ యొక్క పనితీరును అధ్యయనం చేయడానికి, బాహ్య BaCl2 బ్లాక్‌ను EDTA జోడించడం ద్వారా భర్తీ చేసినప్పుడు పొటాషియం విడుదల ప్రారంభించబడింది. పొటాషియం విడుదల తక్కువ pH వద్ద పునర్నిర్మించిన MjK2 లేదా అధిక pH వద్ద అంతర్గత కాల్షియం ఉండటం ద్వారా మధ్యవర్తిత్వం చేయబడింది. MgCl2 ఎటువంటి లేదా బలహీనమైన ప్రభావాన్ని కలిగి ఉంది, అయితే తక్కువ pH వద్ద cAMP తయారీ సమయంలో పొటాషియం యొక్క పూర్తి నష్టాన్ని కలిగించింది. MjK2 ఛానెల్ రంధ్రం మరియు RCK కంపోజిషన్‌లో విభిన్న నిర్మాణ లక్షణాలను కలిగి ఉందని సమలేఖన అధ్యయనాలు వెల్లడించాయి మరియు అందువల్ల వేరే పనితీరును ఆశించవచ్చు. అమైనో యాసిడ్ సీక్వెన్స్ మరియు స్ట్రక్చరల్ అలైన్‌మెంట్‌లు MjK2 యొక్క RCK డొమైన్‌లో Ca2+ బైండింగ్ సైట్ మరియు ఒక సాధారణ న్యూక్లియోటైడ్-బైండింగ్ సైట్ లేవని చూపించాయి మరియు అందువల్ల వేరే ప్రవర్తనను ఆశించవచ్చు. అదనంగా, మానవ స్పెర్మ్ K+ ఛానెల్‌లు hslo1 మరియు hslo3లలో కనుగొనబడిన లైసిన్ రీచ్ లింకర్ ప్రాంతం గేటింగ్ ప్రవర్తనలో సారూప్య పాత్రను పోషిస్తుంది.